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          利用斑馬魚篩選具有血管抑制的藥物
          來源: | 作者:bioservice | 發布時間: 2020-06-12 | 1391 次瀏覽 | 分享到:

          實驗材料:實驗動物 AB系野生斑馬魚,血管熒光轉基因斑馬魚Tg,三卡因,體式熒光顯微鏡、光照培養箱、斑馬魚養殖飼養設備,蘇尼替尼,dmso,目的藥物,12孔培養板,移液器,E3緩沖液

           

          實驗步驟:

          步驟:

          1 準備裝滿養殖水的一套配種缸,包括內部的產卵框(內框)和外缸,將孵化好的豐年蟲喂養斑馬魚,將進食一小時之后的性成熟的血管熒光品系的雌魚或者雄魚和對應的AB系斑馬魚11放置于產卵缸中配種當天下午。密度不易過高,并用隔離板將雌魚和雄魚分開,蓋上蓋子防止魚跳出。雌雄區別:雄斑馬魚腹部扁平體型細長,體色偏黃;雌斑馬魚腹部膨大體型豐滿,腹部銀亮。

          2 將交配盒放置在 28℃下,避光過夜

          3 次日早上給予光照,將配種內框(內有斑馬魚)小心地轉移到事先準備好的裝有少量系統水的配種外缸內,然后去除隔離板。斑馬魚開始交配。交配期間,盡量避免干擾

          4 收集產卵缸底下的胚胎于小盒子中靜置6h 

          5 6h后去掉未受精的白色的胚胎,同時在顯微鏡下觀察未受精以及發育異常的胚胎,將其移除

          6 配置不同濃度的藥物組(10,15,20,25umol/L,以及空白組,陽性對照組(蘇尼替尼10umol/L),緩沖液為E3溶液。

          7 12孔培養板進行選取好發育正常的胚胎培養,每孔2ml,每孔20個胚胎,每一組做三個平行,在培養板的蓋板上打幾個孔。

          8 28攝氏度恒溫培養箱中培養,24后換液繼續培養(光照14h,黑暗10h

          9 48h后提示熒光顯微鏡觀察血管抑制效果并拍照。

          10 統計抑制效果。

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